胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)是蛋白酶的一種,EC3.4.21.4。是以無(wú)活性的酶原形式存在于動(dòng)物胰臟中,在Ca2+的存在下,被腸激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,從肽鏈N端賴氨酸和異亮氨酸殘基之間的肽鍵斷開(kāi),失去一段六肽,分子構(gòu)象發(fā)生一定改變后轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘囊鹊鞍酌?。廣泛用于各種生物技術(shù)過(guò)程中,如:蛋白質(zhì)或多肽的生產(chǎn);蛋白質(zhì)的酶解;蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究;各種組織的細(xì)胞分離等。
動(dòng)物胰蛋白酶
最初胰蛋白酶主要從豬、牛的胰臟中提取,但因其動(dòng)物源性,存在未知病毒(如非洲豬瘟病毒和瘋牛病朊病毒等)和外源因子污染的風(fēng)險(xiǎn),且常因分離純化不徹底,存在其它酶類(如糜蛋白酶等,對(duì)底物的特異性切割賴氨酸和精氨酸位點(diǎn)產(chǎn)生影響,故此種方法產(chǎn)生的胰蛋白酶在胰島素等蛋白藥物的生產(chǎn)和分析中的應(yīng)用受到較大的限制。
從動(dòng)物胰臟中提取胰蛋白酶時(shí),一般是用稀酸溶液將胰腺細(xì)胞中含有的酶原提取出來(lái),再沉淀除去大量的酸性雜蛋白以及非蛋白雜質(zhì),再分級(jí)鹽析將胰蛋白酶原等(包括大量糜蛋白酶原和彈性蛋白酶原)沉淀析出。經(jīng)溶解后,以極少量活性胰蛋白酶激活,使其酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘囊鹊鞍酌福拥鞍酌负蛷椥缘鞍酌竿瑫r(shí)也被激活),被激活的酶溶液再以鹽析分級(jí)的方法除去糜蛋白酶及彈性蛋白酶等組分。收集含胰蛋白酶的級(jí)分,并用結(jié)晶法進(jìn)一步分離純化。
重組胰蛋白酶
為了避免已知的動(dòng)物源污染和未知的污染,重組胰蛋白酶應(yīng)運(yùn)而生,通過(guò)基因重組技術(shù)獲得工程菌來(lái)表達(dá)胰蛋白酶原,可以產(chǎn)生高純度與高活力的胰蛋白酶,滿足蛋白質(zhì)研究與藥物蛋白生產(chǎn)的需要,同時(shí)又避免了外源因子污染的風(fēng)險(xiǎn)。
制備重組胰蛋白酶需要培養(yǎng)包含胰蛋白酶原基因的工程菌并誘導(dǎo)胰蛋白酶原基因表達(dá),對(duì)得到的包涵體形式的蛋白進(jìn)行一系列變復(fù)性和純化處理,最終得到具有活性的胰蛋白酶。
重組胰蛋白酶生產(chǎn)過(guò)程中不使用動(dòng)物源成分,因此不會(huì)具有動(dòng)物病毒和外源因子污染的風(fēng)險(xiǎn)。
冀百康重組胰蛋白酶
重組胰蛋白酶(生物化學(xué)級(jí))
本品系重組酵母菌表達(dá)、經(jīng)多步分離純化后冷凍干燥制成,具有天然豬胰蛋白酶相同的活力和特異性。本品生產(chǎn)過(guò)程中未使用任何動(dòng)物源的材料,非常適合代替動(dòng)物提取的胰蛋白酶。
本品為國(guó)家高新技術(shù)產(chǎn)品,且已申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專利CN201811428317.X
重組胰蛋白酶(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí))
冀百康在重組胰蛋白酶(生物化學(xué)級(jí))基礎(chǔ)上,改進(jìn)純化技術(shù)和凍干方法,全新推出細(xì)胞培養(yǎng)專用的重組胰蛋白酶,特別適合各種動(dòng)物細(xì)胞的消化。